MauriceFlex™ 是最新一代 Maurice™ 家族产品，具备 icIEF 组分收集功能，能够实现 icIEF 模式多种样品的分离和制备回收。组分收集功能需使用 MauriceFlex™ 卡盒进行等电聚焦，用以分离蛋白质电荷变异体。一旦聚焦和分离后，电荷变异体通过化学迁移方式，进而用于组分收集。
与离子交换色谱 (IEX) 相比，MauriceFlex™ 组分收集更快速，可提供更高分辨率以及基于 pI 等电点的谱图，克服了在线直连 cIEF-MS 的一些局限性，例如需要配备专用接口以及背景电解质与质谱不兼容等问题。此外，离线组分收集以及从多个组分中汇集电荷变异体为质谱表征提供了更多的灵活性，灵活实现完整分子量、还原后分子量和肽图分析。
MauriceFlex™ 支持常规 icIEF 和 CE-SDS 分析。所有数据通过 iCE 软件处理 (21CFR Part 11兼容)。icIEF 和 CE-SDS 双模式符合2020版中国药典。
01. 实验亮点
通过使用 MauriceFlex™ 对 NIST mAb (RM 8761) 进行 icIEF 组分收集以及质谱鉴定实验，已证实：
• 高纯度的电荷变异体可以在一天内获得。
• 单次组分收集可以提供足够的电荷变异体用于完整分子量分析。
• 通过多次汇集电荷变异体，用户可进行 LC-MS 肽图分析。
02. 组分收集流程
（1）设置 (~30min)
- 加入试剂和 NIST mAb (1mg/mL)
- 插入 MauriceFlex™ 卡盒
（2）聚焦 (45min)
- 电压
- 10min@500V
- 10min@1000V
- 25min@1500V
（3）迁移 (25min)
- 迁移试剂 5mM NH4Ac
- 电压1000V
（4）收集 (20min)
- 组分收集：36 个组分通过 25s/组分的频率在 96 孔板收集，每个孔包含 30μL 5mM NH4Ac
- 电压：1000 V
（5）确认（4~5hours）
- 通过分析型 Maurice™ icIEF 确认组分和纯度
- 16个组分得到确证
03. 实验结果
图1 NIST mAb分析型 (A) 和组分收集型icIEF图谱 (B)
MauriceFlex™组分收集方法可以基于Maurice™ icIEF 分析方法快速建立。使用 Maurice™ 分析型和 MauriceFlex™ 组分收集型卡盒对 NIST mAb 进行 icIEF 分离。我们鉴定了 NIST mAb 的 5 个电荷变异体 (B2、B1、M、A1、A2)，并获得了它们的相对丰度 (图1A)。两种图谱显示电荷变异体数量相同。每个变异体的相对丰度 (%) 是根据分析型图谱 (A) 中的峰面积计算的。
图2 Maurice™ icIEF分析型实验对组分的电荷变异体进行鉴定和纯度验证
图2显示了含有最高纯度单个电荷变异体的icIEF电泳图，组分#10中除了低丰度 (0.9%) B2的纯度为65%外，我们获得了4个电荷变异体纯度为100%的组分。
图3 LC-MS提供电荷变异体完整分子量分析 - 总离子流图 (上)、质谱图 (中) 和去卷积谱图 (下)
表1 完整分子量分析修饰汇总表
高纯度电荷变异体组分 LC-MS 完整分子量分析如图3所示，从去卷积质谱中鉴定出的每种电荷变异体的修饰如表1所示。鉴定结果与 NIST mAb 电荷变异体已知的修饰情况一致。
图4 B1和 A1组分的肽图分析
表2 所有电荷变异体组分的轻链 (LC) 和重链 (HC) 序列覆盖
图4 和表2 展示了汇集 10 次后样本的肽图分析结果。结果表明，除了低丰度 B2 (相对丰度0.9%) 和 A2 的重链 (HC) 外，其余电荷变异体的序列覆盖率均在 90% 以上。MauriceFlex™
MauriceFlex™
全自动毛细管电泳分析与组分收集系统
• 一机智能：CE-SDS、Turbo CE-SDS、icIEF和icIEF组分收集
• 一机至简：免组装毛细管卡盒一键切换，快速方法开发，平台方法易转移
• 一机致用：贯穿从早期开发到GMP放行多种应用
> >关于ProteinSimple：
美国纳斯达克上市公司Bio-techne (Nasdaq: TECH) 集团旗下的行业领先蛋白质分析品牌，一直致力于研发和生产更精准、更快速、更灵敏的创新性蛋白质分析工具，包括蛋白质电荷表征、蛋白质纯度分析、蛋白质翻译后修饰定量检测、蛋白质免疫实验如 Western 和 ELISA 定量检测蛋白质表达等技术，帮助生物制药、细胞治疗、生物医学和生命科学等领域科学家解决蛋白质分析问题，深度解析蛋白质和疾病相互关系。
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